漆酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC1635
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 工作液的配制：一瓶試劑二用10 mL試劑一溶解。現用現配。

產品說明：
漆酶（CE1.10.3.2）是一種含銅的多酚氧化酶，屬于銅藍氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一種環保型酶，其催化性質在生物檢測中有廣泛的應用。
漆酶分解底物ABTS產生ABTS自由基，在420nm處的吸光系數遠大于底物ABTS，測定ABTS自由基的增加速率，可計算得漆酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、天平、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水，水浴鍋
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）   
1、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細胞：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
3、培養液：直接檢測。
二、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至420nm，分光光度計蒸餾水調零。

2. 水浴鍋溫度調至45℃。

3. 操作表：在微量玻璃比色皿/96孔板中分別加入下列試劑：

注意事項：
1、工作液需臨用前配制，并且盡快使用，4℃保存一周，若變色則不能使用。
2、測定前進行預實驗，若吸光值較高，請將樣本用提取液進行適當的稀釋再測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。
3、空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔，正常情況下，OD值變化不超過0.05。
實驗實例：

1. 取0.1g香菇加1mL提取液進行樣本處理，取上清后按照測定步驟操作，用微量玻璃比色皿測得計算ΔA測定管=A2測定-A1測定=0.8963-0.1004=0.7959，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0.0729-0.0542=0.0187，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.7959-0.0187=0.7772，按樣本質量計算酶活得：

漆酶酶活（U/g 質量）=61.7×ΔA÷W=61.7×0.7772÷0.1=479.53 U/g 質量。
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