疏水層析填料 丁基-瓊脂糖凝膠 4B
貨號 ：S9280
規(guī)格 ：25ml

簡介
   丁基-瓊脂糖凝膠 4B是將苯基鍵合在瓊脂糖凝膠4B上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標產品純化分離的疏水類介質。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
   本品呈白色球狀凝膠，無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
理化 特性

*柱子：內徑16mm、柱長10cm，柱床高5cm，25℃，流動相為0.1mol/LNaCl。

三 、  適用范圍
    丁基-瓊脂糖凝膠 4B是一種疏水層析介質，利用樣品中組分疏水性的不同進行分離。用于生物大分子的純化分離。

四 、 保存條件
    產品應密封貯存在 4℃~30℃（保存溶液為 20% 乙醇+0.1M 醋酸鈉） ，通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過的柱子貯存在 4℃（20% 乙醇） 。
保質期：5 年。

五 、 操作步驟 ：
1 、 裝柱
    （1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。
    （2）根據柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉 20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的比例）配成勻漿。
    （3）將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜） ，務必使底端無氣泡。
    （4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
    （5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2 、 平衡
     讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和 pH 不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH4)2SO4 等。
3 、 上樣
    （1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
    （2）一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產物。
    （3）介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質對組分吸附牢。
4 、 洗脫
     疏水介質可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如 0.02~0.05mol/L 的 PBS。
5 、 再生
    一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗 10 倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6 、 在位清洗
  （1）對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。
  （2）對沉淀蛋白、對以疏水性結合的蛋白或脂類，可用 1M NaOH 去除。
  （3）對強疏水性結合的蛋白、脂類等，用 4~10 倍柱體積的 70%乙醇或 30%異丙醇清洗，但     要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。
    清洗完畢后，用少 3 倍緩沖液平衡柱子。
7 、 注意
    在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
8 、 去熱源
    用 0.5M 的氫氧化鈉清洗柱子 5~6 小時或用 0.1M 的氫氧化鈉 24 小時。或用以下方法步驟去除：

（1）2 倍柱體積的 70%乙醇；
（2）2 倍柱體積 50mM Tris-HCl pH7.5；
（3）1 倍柱體積 4M 尿素；
（4）3 倍柱體積的 Tris 緩沖液+0.1M NaCl；
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

9 、  消毒
    用 0.5~1M NaOH 室溫下洗 8~10 倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

疏水層析填料 丁基-瓊脂糖凝膠 4B訂購說明：

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