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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4070-50T/24S
更新時間：2024-04-12
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：915
010-50973130
產品分類
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單寧酶活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC4070
規格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體75 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前取1支加入1.5 mL無水乙醇混勻溶解，用不完的試劑可以2-8℃保存一周；
標準品：5 mg沒食子酸丙酯。臨用前加入1.178 mL無水乙醇充分混勻溶解，配成20 μmol/mL的標準溶液，2-8℃保存兩周。
產品說明：
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，存在于富含單寧的植物，也廣泛存在于微生物中，可以水解酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。
使用沒食子酸丙酯（PG）作為單寧酶酶促反應的底物，其在270nn下有特征吸收峰，根據其反應前后吸光度的變化來計算單寧酶活力。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、1mL石英比色皿、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、超聲破碎儀、研缽/勻漿器、乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液，冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、細胞或細菌樣本的制備：先收集細胞或細菌樣本到離心管內，棄上清，按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）。10000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
紫外分光光度計預熱30min，波長調至270nm，蒸餾水調零。
標準液的稀釋：取10μL 20μmol/mL的標準溶液，加入3990μL提取液，充分混勻，配制成0.05μmol/mL標準液使用，現用現配。（實驗中每管需要1000μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
對照管樣本處理：吸取0.1mL樣本于1.5mLEP管中作為對照管，沸水浴5min，冷卻至常溫待測。
加樣表（在1.5mLEP管中分別加入）
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
| 提取液 | 850 | 850 |
| 試劑一 | 50 | 50 |
| 樣本 | 100 | 100（已滅活） |
| 混勻，置于40℃水浴鍋中準確反應10min，立即沸水浴5min，冰浴冷卻至常溫。10000rpm，室溫離心10min，取上清液待測。 | ||
| 上清液 | 50 | 50 |
| 提取液 | 950 | 950 |
| 充分混勻后測定270nm下的吸光度，分別記為A測定、A對照，計算ΔA測定=A對照-A測定。另取1000μL標準液于石英比色皿中，測定270nm處的吸光度，記為A標準。每個測定管需設一個對照管。標準管只需測1-2次。 | ||
注意事項：
如果A測定大于1.5，可以適當加大稀釋倍數，保證總體積1mL不變，如20μL上清液和980μL提取液（相當于F=1000/20=50），計算公式中需改變F和V上清液的數值。
實驗實例：
取0.1g玉蘭葉加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A對照-A測定=1.126-1.033=0.093，按樣本質量計算酶活得：單寧酶（U/g質量）=1000×ΔA÷A標準÷W=1000×0.093÷0.609÷0.1=1527.09 U/g 質量。
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