木質(zhì)素含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC4205
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液配制：

1. 試劑三：自備，石 油 醚，約需要35mL。（石油 醚沸程：30～60℃）

2. 試劑四：該試劑具有強(qiáng)揮發(fā)性和一定的毒性，注意在通風(fēng)櫥操作并且每次用完用封口膜密封保存。

3. 試劑五：試劑有腐蝕性，注意防護(hù)。

產(chǎn)品說(shuō)明：
木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一，具有使細(xì)胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中，主要作用是通過(guò)形成交織網(wǎng)來(lái)硬化細(xì)胞壁，為次生壁主要成分。
木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在280nm處有特征吸收峰，280nm的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板（非聚苯乙烯材質(zhì)）、可調(diào)式移液槍、研缽、EP管、封口膜、冰乙酸、石油 醚、30-50目篩和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
樣本80℃烘干至恒重，研磨，過(guò) 30-50目篩，稱取約3mg于1.5mLEP管中。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至280nm，分光光度計(jì)用冰乙酸調(diào)零。

2. 操作表（在1.5mL離心管中依次加入下列試劑）：

乙酰化：

測(cè)定：（注：由于冰乙酸易揮發(fā)，請(qǐng)混勻后立即測(cè)定！建議混勻一管測(cè)一管）

三、木質(zhì)素含量計(jì)算
1、按微量石英比色皿計(jì)算：
木質(zhì)素含量（mg/g）=ΔA÷ε÷d×V檢測(cè)÷（V上清×W÷V乙酰化）=1.3105×ΔA÷W
木質(zhì)素的百分含量（%）=木質(zhì)素含量÷1000×100%=0.13105×ΔA÷W
V乙酰化：乙酰化反應(yīng)體積，0.612mL；ε：木質(zhì)素消光系數(shù)，23.35mL/mg/cm；d：比色皿光徑，1cm；V上清：上清液體積，0.012mL；V檢測(cè)：檢測(cè)體積，0.6mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000：換算系數(shù)，1g=1000mg。
2、按96孔UV板進(jìn)行計(jì)算：
將上述公式中的d-1cm修改為d-0.6cm（96孔板光徑）進(jìn)行計(jì)算即可。
注意事項(xiàng)：

1. 試劑四有毒性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施，加熱前必須用封口膜密封，以防氣體溢出。

2. 加熱過(guò)程中有劇烈反應(yīng)，震蕩時(shí)輕搖，以免壓力過(guò)大噴出造成人身傷害。

3. 冰乙酸具有強(qiáng)刺激性，建議操作過(guò)程全部在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

4. 取上清加冰乙酸步驟根據(jù)自己樣本乙酰化程度，冰乙酸的用量可調(diào)整，保證吸光值在0.1-0.8之間即可，并在公式中參與計(jì)算。

5. 由于冰乙酸具有揮發(fā)性，建議用比色皿進(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)混勻后必須立即測(cè)定！

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Liang R, Zhao J, Li B, et al. Implantable and degradable antioxidant poly (ε-caprolactone)-lignin nanofiber

membrane for effective osteoarthritis treatment[J]. Biomaterials, 2020, 230: 119601.
參考文獻(xiàn)：
[1] Goldschmid O. Determination of phenolic hydroxyl content of lignin preparations by ultraviolet spectrophotometry[J]. Analytical Chemistry, 1954, 26(9): 1421-1423.
[2] Janshekar H, Brown C, Fiechter A. Determination of biodegraded lignin by ultraviolet spectrophotometry[J]. Analytica Chimica Acta, 1981, 130(1): 81-91.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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