北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4260-50T/48S
更新時間：2024-04-15
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1011
010-50973130
產品分類
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直鏈淀粉含量檢測試劑
盒說明書
可見分光光度法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC4260
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體50 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | - | 2-8℃保存 |
| 試劑五 | 液體1.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體10mL×1支 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：*50 mL自備；
試劑四：提供125mL空瓶一個；將試劑三：H2O =9 mL：91 mL混勻，現用現配，2-8℃保存半年；
標準品：10 mg直鏈淀粉。臨用前加入0.1 mL無水乙醇和0.9 mL試劑三，混勻后封口膜封口，沸水浴至溶解，即10 mg/mL的直鏈淀粉，2-8℃保存半年。
產品說明：
直鏈淀粉是D-葡萄糖基以α-(1,4)糖苷鍵鏈接的多糖鏈，直鏈淀粉含量影響著食品的食用品質和外觀品質，與食品安全息息相關。
直鏈淀粉和碘形成藍色絡合物，利用乙醇分開樣本中的可溶性糖和淀粉，再用碘與其反應得到直鏈淀粉含量。
技術指標：
低檢出限：0.006 mg/mL
線性范圍：0.0125-0.6 mg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、天平、臺式離心機、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、*、無水乙醇、EP管、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取0.01g烘干樣本，加入1mL試劑一，充分勻漿；
80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀；
在步驟2沉淀中加入1mL試劑二（*）振蕩 5min；3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀；
在步驟3沉淀中加入5mL試劑四充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后3000g，25℃離心5min，取上清待測。
二、測定步驟
分光光度計預熱30min以上，調節雙波長至550nm和485nm，蒸餾水調零。
標準溶液的稀釋：取40μL 10mg/mL標準溶液，加入960μL試劑四，充分混勻，配制成0.4mg/mL標準溶液使用，現用現配。（實驗中每管需要100μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
操作表 (在1.5mL離心管中依次加入下列試劑) ：
| 試劑名稱 | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
| 樣本（µL） | 100 | - | - |
| 標準溶液（μL） | - | 100 | - |
| 蒸餾水（µL） | - | - | 100 |
| 試劑五（µL） | 20 | 20 | 20 |
| 試劑六（µL） | 20 | 20 | 20 |
| 蒸餾水（µL） | 860 | 860 | 860 |
| 充分混勻，測定550nm和485nm處的吸光值，550nm下的測定管、標準管、空白管分別記為A測定、A標準和A空白，485nm下的分別記為A’測定、A’標準、A’空白，計算ΔA測定=（A測定-A空白）-（A’測定-A’空白），ΔA標準=（A標準-A空白）-（A’標準-A’空白）。標準管和空白管只需測1-2次。 | |||
三、直鏈淀粉含量計算
直鏈淀粉含量（mg/g 質量）=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V樣總÷W=2×ΔA測定÷ΔA標準÷W
C標準：標準溶液濃度，0.4mg/mL；V樣總：加入試劑四體積，5mL；W：樣本質量，g。
注意事項：
反應后建議在20min內檢測完成防止褪色。
若A測定大于1，建議樣本上清用試劑四稀釋后再進行測定；若A測定低于0.03時，可以提取時減少試劑四體積進行測定。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
取0.01g烘干玉米于研缽中研碎，加入 1mL試劑一，充分勻漿后轉移到 EP 管中，80℃水浴提取30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入1mL試劑二（乙*）振蕩5min，3000g，25℃離心5min，棄上清，留沉淀，加入5mL試劑四充分溶解，90℃水浴10min，冷卻后3000g，25℃離心5min，取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=（A測定-A空白）-（A’測定-A’空白）=（0.664-0.003）-（0.474-0.034）=0.221，ΔA標準=（A標準-A空白）-（A’標準-A’空白）=（0.723-0.003）-（0.447-0.034）=0.307，按樣本質量計算含量得：直鏈淀粉含量（mg/g 質量）=2×ΔA測定÷ΔA標準÷W=143.97 mg/g質量。
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