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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4355-100T/96S
更新時間：2024-04-16
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1309
010-50973130
產品分類
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組織鐵含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC4355
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
標準液 | 液體3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：臨用前配制，取1瓶加入5 mL蒸餾水充分溶解，試劑一變黑后則不能使用，2-8℃保存一周；
2、 試劑二：臨用前配制，取1瓶加入235 μL冰醋 酸，加入7.5 mL蒸餾水充分溶解；溶解后2-8℃保存一周；
3、 標準液：1 μmol/mL Fe3+標準液。
4、 標準溶液的稀釋：臨用前取100μL 1 μmol/mL Fe3+標準液，加入700μL蒸餾水，充分混勻，配制成0.125 μmol/mL的標準溶液進行實驗，現用現配。（實驗中每管需要120μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）
產品說明：
鐵是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統的主要成分，幫助氧的運輸，促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機體的免疫功能。
技術指標：
低檢出限：0.00206 μmol/mL
線性范圍：0.0039-0.25 μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、恒溫培養箱/水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、氯仿、冰乙酸、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。4000g 4℃離心10分鐘，取上清。
二、測定步驟
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至520nm。蒸餾水調零。
2. 加樣表：
空白管 | 測定管 | 標準管 | |
蒸餾水 | 120 | - | - |
0.125μmol/mL標準液 | - | - | 120 |
樣本 | - | 120 | - |
試劑一 | 60 | 60 | 60 |
試劑二 | 120 | 120 | 120 |
混勻后蓋緊，置于沸水浴5min，自來水冷卻 | |||
氯仿（自備） | 60 | 60 | 60 |
充分震蕩混勻后室溫10000rpm，離心10min，小心吸取上層無機相200μL，加入微量玻璃比色皿或者96孔板中，于520nm立即測定吸光度，分別記為A空白管、A測定管、A標準管，計算ΔA標準=A標準管-A空白管，ΔA測定=A測定管-A空白管。空白管和標準管只需做1-2次。 | |||
三、組織鐵含量計算
1．按組織質量計算：
組織鐵含量（μg/g 質量）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×55.845÷W= 6.98×ΔA測定÷ΔA標準÷W
2．按組織蛋白濃度計算
組織鐵含量（μg/mg prot）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）
= 6.98×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
C標準液：0.125μmol/mL Fe3+標準液；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V提取：提取液體積，1mL；55.845：Fe的相對分子質量，55.845μg/μmol。
注意事項：
1、 當ΔA大于0.6 時，建議將樣本用提取液稀釋后進行測定；ΔA過小時，可增加加入的樣本體積來測定。
2、 試劑一溶解變黑后則不能使用；試劑二有毒性，做好防護措施。
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