海藻糖酶（THL）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2515
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1支加入0.6mL試劑一，充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存1周；

2. 標準品：含10mg無水*萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1mL蒸餾水溶解，配制成10mg/mL標準液待用，4℃可保存2周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，2-8℃保存4周；

產品說明：
THL（EC 3.2.1.28）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應。
采用3,5－二硝基水楊酸法測定THL催化海藻糖產生的還原糖的含量。還原糖與3,5－二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內還原糖的量和反應液的顏色深度成正比，由此判斷THL活性的高低。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、低溫離心機、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌或細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液充分勻漿以破碎并裂解細胞，超聲波破碎，（冰浴，功率200W，超聲開3秒，關10秒，重復30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。8000g，4℃下離心10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）的處理：吸取約0.1mL血清（漿），加入0.9mL提取液，冰浴中勻漿。8000g，4℃下離心10min，
取上清，置冰上待測。

相關發表文獻：

1. Yan P, Wen C, Zhang S, et al. A toxicological, metabonomic and transcriptional analysis to investigate the property of mulberry 1-deoxynojirimycin against the growth of Samia cynthia ricini[J]. Pesticide biochemistry and physiology, 2018, 152: 45-54.

2. Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019;153:152-160.(IF2.87)

3. Goddijn O J M, Verwoerd T C, Voogd E, et al. Inhibition of trehalase activity enhances trehalose accumulation in transgenic plants[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 181-190.

4. Küenzi M T, Fiechter A. Changes in carbohydrate composition and trehalase-activity during the budding cycle of Saccharomyces cerevisiae[J]. Archiv für Mikrobiologie, 1969, 64(4): 396-407.

參考文獻：
[1] Goddijn O J M, Verwoerd T C, Voogd E, et al. Inhibition of trehalase activity enhances trehalose accumulation in transgenic plants[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 181-190.
[2] Küenzi M T, Fiechter A. Changes in carbohydrate composition and trehalase-activity during the budding cycle of Saccharomyces cerevisiae[J]. Archiv für Mikrobiologie, 1969, 64(4): 396-407.

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