儲存條件
-20℃
中文名稱
L-半乳糖酸-1,4-內酯脫氫酶試劑盒維生素C
有效期
6個月
單位
盒
英文名稱
L-galactose-1,4-lactone dehydrogenase(Gal LDH) Activity Assay Kit
別名
L-半乳糖酸-1,4-內酯 Gal LDH Gal LDH Kit L-半乳糖酸-1,4-內酯脫氫酶(GalLDH)試劑盒
檢測方

產品型號：BC1250-50T/48S

更新時間：2024-04-08

廠商性質：生產廠家

訪問量：1973

服務熱線

010-50973130

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產品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產品介紹

L-半乳糖酸-1,4-內酯脫氫酶（Gal LDH）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC1250
規(guī)格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑一：臨用前加入40 mL蒸餾水，充分溶解；
試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水，充分溶解。

產品說明：
L-半乳糖途徑是合成AsA的主要途徑。Gal LDH位于線粒體內膜，負責催化植物體內AsA生物合成的最后一步，也是該途徑的關鍵酶之一，對植物體內AsA含量的積累起著至關重要的作用。
Gal LDH催化L-半乳糖內酯還原氧化型細胞*素c（Cyt c），還原型Cyt c在550nm有吸收峰；測定還原型Cyt c增加速率，來計算Gal LDH活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
臺式離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、可調式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g樣本，加提取液1mL，冰上充分研磨，13000g 4℃離心10min，取上清液置冰上待測。
二、測定步驟

分光光度計預熱30min，調節(jié)波長到550nm，蒸餾水調零。
按樣本數取出一定量的試劑一在25℃水浴鍋中預熱30min以上，其余的分裝保存(-20℃)。
空白管：依次在1mL比色皿中加入100μL蒸餾水、800μL預熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值，分別為A1，A2，ΔA空白管=A2-A1。
測定管：依次在1mL比色皿中加入100μL上清液、800μL預熱的試劑一和100μL試劑二，迅速混勻后于550nm比色，記錄10s和130s的吸光值，分別為A3，A4，ΔA測定管=A4-A3。

三、Gal LDH活性計算
（1）按蛋白濃度計算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘還原1μmol Cyt c為1個酶活單位。

Gal LDH (U/mg prot) = [(ΔA測定管-ΔA空白管)÷ε÷d×V反總×10⁶]÷（Cpr×V樣）÷T
=0.289×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷Cpr
（2）按樣本質量計算
Gal LDH活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘還原1μmol Cyt c為1個酶活單位。
Gal LDH（U/g 質量）=[(ΔA測定管-ΔA空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶]÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=0.289×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷W
ε：還原型Cyt c摩爾消光系數，17.3×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應體系總體積，1mL=0.001L；10⁶：單位換算系數，1mol=1×10⁶μmol；V樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0.1mL；V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，蛋白質濃度需要另外測定；W：樣本質量，g；T：反應時間，2min。
注意事項：
1、在測定酶活時要注意溫度。建議取小燒杯一只裝入一定量的25℃蒸餾水，將此燒杯放入25℃水浴鍋中，在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。
2、建議兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。
3、加入最后一種試劑后需迅速混勻并測定OD值。
實驗實例：

取0.1g獼猴桃加入1mL提取液冰上充分研磨，13000g 4℃離心10min，取上清液置冰上，按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A4-A3=0.881-0.784=0.097，ΔA空白管=A2-A1=0，按樣本質量計算酶活得：

Gal LDH（U/g 質量）=0.289×(ΔA測定管-ΔA空白管) ÷W=0.2803 U/g 質量。
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