北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學(xué)試劑及試劑盒領(lǐng)域
服務(wù)熱線：18101056239
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產(chǎn)品型號：BC1390-50T/48S
更新時間：2024-04-07
廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家
訪 問 量 ：1602
010-50973130
產(chǎn)品分類
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單寧含量檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC1390
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體75 mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 常溫保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg單寧酸。臨用前加入1.175 mL提取液溶解為5000 nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存兩周。
產(chǎn)品說明：
單寧又稱植物多酚，是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物。單寧可作為潛在的生物標(biāo)記物；與蛋白質(zhì)結(jié)合的能力又稱為收斂性或澀性。其收斂性是多種生理活性的基礎(chǔ)，如止血、抗腫瘤、抗衰老等生理活性，也是影響產(chǎn)品口感的因素之一。
根據(jù)光譜特性，單寧在275nm下有較強(qiáng)的紫外吸收，通過利用活性炭能夠特異吸附單寧的性質(zhì)來檢測單寧含量。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.385 nmol/mL
線性范圍：0.39-18 nmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、1mL石英比色皿、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、30-50目篩、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
將樣本烘干至恒重，粉碎，過30-50目篩之后，稱取約0.1g，加入2mL提取液（封口膜封口防止液體濺出），于70℃水浴，準(zhǔn)確提取30min，期間可搖晃數(shù)次。12000rpm，25℃，離心10min，取上清，用提取液定容至2mL，待測。
二、測定步驟
1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min，波長調(diào)至275nm，提取液調(diào)零。
2. 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：將標(biāo)準(zhǔn)液用提取液稀釋為25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3. 標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：
序號 | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 提取液體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） |
1 | 5000 | 100 | 900 | 500 |
2 | 500 | 200 | 3800 | 25 |
3 | 25 | 2000 | 2000 | 12.5 |
4 | 12.5 | 2000 | 2000 | 6.25 |
5 | 6.25 | 2000 | 2000 | 3.125 |
6 | 3.125 | 2000 | 2000 | 1.5625 |
7 | 1.5625 | 2000 | 2000 | 0.78125 |
備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需1000µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
4. 加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
試劑一 | 大約10-15mg | - | - | 大約10-15mg |
提取液 | - | - | - | 1mL |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | 1mL | - |
樣本 | 1mL | 1mL | - | - |
充分混勻震蕩5min，13000g 室溫離心20min。取上清液測定275nm下的吸光度，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，計算ΔA測定=A對照管-A測定管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測1-2次。
三、單寧含量計算
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y，nmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（x，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（x，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（y，nmol/mL）。
2. 單寧含量計算：
（1）按蛋白濃度計算
單寧含量（nmol/mg prot）=y×V提取÷(V提取×Cpr) =y÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
單寧含量（nmol/g 質(zhì)量）=y×V提取÷W=2y÷W
Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V提取：提取液體積，2mL。
注意事項：
1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。
2. 按蛋白濃度計算時，由于提取液中含有破壞蛋白結(jié)構(gòu)的成分，故需要重新提取蛋白進(jìn)行測定。
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