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專注于生物學試劑及試劑盒領域
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產品型號：BC5870-50T/48S
更新時間：2024-04-23
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1983
010-50973130
產品分類
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葡萄糖含量檢測試劑盒(鄰甲苯胺顯色法)說明書
可見分光光度法
貨號：BC5870
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：取9mL試劑二、45mL冰乙酸加入試劑一混合，最后工作液為均一澄清液體。溶解好的試劑-20℃分裝避光可以保存8周。（注：若先將試劑一、試劑二混合，則溶液為無機相和水相的液體混合物，加入冰乙酸混勻后溶液會變均一澄清）
2、 標準品：臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解，制備 10 mg/mL 葡萄糖標準溶液待用；用不完的試劑2-8℃保存4周。臨用前取30μL10mg/mL葡萄糖標準溶液，加入930μL蒸餾水，配制成0.3125mg/mL葡萄糖標準溶液。
產品說明：
葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯*能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。
葡萄糖與鄰甲苯胺在強酸溶液中加熱，葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合成葡萄糖基胺，后者脫水生成席夫（Schiff）堿，呈現藍綠色，在630nm處有吸收峰。該試劑盒適合測定動物組織、血清（漿）及細胞（細菌）樣本。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、可調式移液槍、冰乙酸（AR＞98%）、5%三氯*酸（根據注意事項確定是否需要自備）、異丙醇（根據注意事項確定是否需要自備）、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 血清（漿）等液體樣本：直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。
2. 細胞/細菌：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
3. 動物組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
二、測定步驟
1．可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至630nm，冰乙酸調零。
2．操作表：（在1.5mL EP管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 100 | - | - |
標準品 | - | 100 | - |
蒸餾水 | - | - | 100 |
試劑一 | 1000 | 1000 | 1000 |
渦旋混勻，100℃煮沸15min（蓋緊，以防止水分散失），冷卻至室溫后，取1000μL 至1mL玻璃比色皿中測定630nm處測吸光值，分別記為A測定、A標準、A空白。計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A 空白。標準管和空白管只需測 1-2 次。 | |||
三、葡萄糖含量計算
1. 按樣本質量計算
葡萄糖含量（mg/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V提÷W = 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷W
2. 按樣本蛋白濃度計算
葡萄糖含量（mg/mg prot）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷(V樣×Cpr) =0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
3. 按液體體積計算
葡萄糖含量（mg/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷V樣= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準
4. 按細胞數量計算
葡萄糖含量（mg/104 cell）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V提÷N= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷N
C標：標準管濃度，0.3125mg/mL；V提：前處理提取液體積，1mL；V樣：加入樣本體積，0.1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；N：細胞數量，以萬計。
注意事項：
1、 試劑一具有腐蝕性，請佩戴好手套口罩，小心操作。
2、 高血脂樣本若最終反應液出現渾濁，在反應液中加入550μL的異丙醇，充分混合，可以溶解脂質，消除渾濁，測定其吸光值。計算時將所測得吸光度乘以1.5。
3、 嚴重黃疸、溶血等血清樣本，需要先制備無蛋白血濾液（建議100μL樣本加300μL 5%三*酸溶液，充分混合，相當于將樣本稀釋四倍，3000rpm 4℃離心10min，取上清待測），再進行計算。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
1. 取100μL人血清樣本，用蒸餾水稀釋5倍，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.277-0=0.277，ΔA標準=A標準-A空白=0.472-0=0.472，按液體體積計算得：
葡萄糖含量（mg/mL）=0.3125×ΔA測定÷ΔA標準×5 =0.917 mg/mL。
2. 取0.1g小鼠肌肉組織，按前處理和測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.098-0=0.098，ΔA標準=A標準-A空白=0.472-0=0.472，按液體體積計算得：
葡萄糖含量（mg/mL）=0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷W =0.659 mg/mL。
參考文獻：
[1] Yee H Y, Goodwin J F. Evaluation of some factors influencing the o-toluidine reaction with glucose[J]. Analytical Chemistry, 2002, 45(13).DOI:10.1021/ac60335a030.
[2] Dubowski K M. An o-Toluidine Method for Body-Fluid Glucose Determination[J]. Clinical Chemistry, 1962(6) :6.DOI:10.1093/clinchem/8.6.592.
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