北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC1040-50T/48S
更新時間：2024-04-24
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1672
010-50973130
產品分類
NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號：BC1040
規(guī)格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
試劑二：臨用前加入360 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑三：臨用前加入327 μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。
具體操作步驟詳和產品說明 見“產品資料"附件
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。
注意事項：
粗酶液的提取必須在0℃- 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。
實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。
當初始讀值小于0.7或者ΔA大于0.5時建議稀釋后測量。
建議一人加樣一人比色。
實驗實例：
取0.05g大鼠肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.917-0.293=0.624，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按樣本質量計算酶活得： NAD-MDH（U/g 質量）=6431×(ΔA測定-ΔA空白) ÷W=6431×0.619 ÷0.05=79616 U/g 質量。
取0.05g柳樹葉加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.812-0.741=0.071，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按樣本質量計算酶活： NAD-MDH（U/g 質量）=6431×(ΔA測定-ΔA空白) ÷W=6431×0.066 ÷0.05=8489 U/g 質量。
取20μL小鼠血漿直接按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.855-0.789=0.066，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.789-0.784=0.005，按血清/血漿體積計算酶活得： NAD-MDH（U/mL）=6431×(ΔA測定-ΔA空白)=6431×0.061=392 U/mL。
參考文獻：
Yao Y X, Li M, Zhai H, et al. Isolation and characterization of an apple cytosolic malate dehydrogenase gene reveal its function in malate synthesis[J]. Journal of plant physiology, 2011, 168(5): 474-480.
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