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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC3105-100T/48S
更新時間：2024-04-11
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1763
010-50973130
產品分類
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土壤硝酸還原酶（S-NR）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC3105
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體25 mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 試劑二 | 液體5 mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 試劑三 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體5 mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 試劑五 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 液體1 mL×1支 | -20℃保存 |
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、恒溫培養箱/水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、30-50目篩、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37度烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至520nm，分光光度計用蒸餾水調零。
NaNO2標準液的配制：用蒸餾水將標準品稀釋1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL。
標準品稀釋表：
| 序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
| 1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
| 2 | 1 | 160 | 40 | 0.8 |
| 3 | 1 | 120 | 80 | 0.6 |
| 4 | 1 | 80 | 120 | 0.4 |
| 5 | 1 | 40 | 160 | 0.2 |
備注：實驗中每個標準管需50µL標準溶液。
樣本測定：
| 試劑名稱 | 1.5mLEP管 | |||
| 測定管 | 對照管 | 標準管 | 空白管 | |
| 風干土樣（g） | 0.05 | 0.05 | ||
| NaNO2標準液（μL） | 50 | |||
| 蒸餾水（μL） | 50 | 50 | 50 | |
| 試劑一（μL） | 180 | 180 | 180 | 180 |
| 試劑二（μL） | 18 | 18 | 18 | |
| 混勻后，置于37℃水浴鍋/恒溫培養箱反應24h | ||||
| 試劑三（μL） | 25 | 25 | 25 | 25 |
| 試劑二（μL） | 18 | |||
| 立刻混勻， 8000rpm室溫離心5min | ||||
| 上清液（μL） | 80 | 80 | 80 | 80 |
| 試劑四（μL） | 20 | 20 | 20 | 20 |
| 混勻后，置于37℃水浴鍋/恒溫培養箱保溫20min | ||||
| 試劑五（μL） | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 試劑六（μL） | 50 | 50 | 50 | 50 |
混勻，顯色20min后，取200μL至微量玻璃比色皿/96孔板，520nm下讀取各管吸光值，分別記為A測定、A對照、A標準、A空白。計算ΔA測定=A測定- A對照，ΔA標準=A標準-A空白。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需檢測1-2次。
三、S-NR活性計算
1、標準曲線繪制：
以1、0.8、0.6、0.4、0.2μmol/mL標準溶液為橫坐標（x軸），ΔA標準為縱坐標（y軸）繪制標準曲線，得到線性回歸方程y=kx+b，將ΔA測定代入方程得到x（μmol/mL）。
2、S-NR活性計算：
單位的定義：每g土樣每天中產生1μmol NO2ˉ的量為一個S-NR活力單位。
S-NR（U/g 質量）=x×V標準÷W÷T=0.05x÷W
V標準：反應體系中加入的標準液體積，0.05mL；W：風干土樣，g；T：反應時間，1d。
注意事項：
試劑一、試劑二和試劑四在冰上放置，用不完的試劑-20℃分裝保存，避免反復凍融。
ΔA測定過小（小于0.01），可延長反應時間（37℃水浴時間）。
當ΔA大于1時，可以將上清液用蒸餾水稀釋后，再進行測定，計算公式中乘以稀釋倍數。
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