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專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC5360-50T/48S
更新時間：2024-04-19
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1100
010-50973130
產品分類
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唾液酸（SA）含量檢測試劑盒
可見分光光度法
貨號：BC5360
規格：50T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
顯色液 | 液體80 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體0.5 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液配制：
標準品：4mmol/L唾液酸標準液。
產品說明：
唾液酸（Sialic acid，SA），又稱N-乙酰神經氨酸，是細胞膜上糖蛋白和糖脂的重要成分，其廣泛的存在于生物體中，參與細胞表面的多種生理功能。
唾液酸在氧化劑存在的情況下與5-甲基間*二酚形成紫紅色絡合物，其在560nm處有最大吸收峰，通過測定產物在560nm的吸光值，可以計算出唾液酸含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者
增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、可調式移液器、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織：按照樣本質量（g）：提取液體積（mL）為1:5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿；3000rpm 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
2. 細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000:1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W，超聲 3s，間隔 7s，總時間3min），3000rpm 4℃離心10min，取上清置冰上待測。
3. 乳液樣本：10000g 4℃離心10min后，去除上層的油脂后使用。
4. 其他液體樣本：直接測定（如有渾濁，可離心后使用）。
二、測定步驟
1、可見分光光度計預熱30min以上，調節波長至560nm，蒸餾水調零。
2、在EP管中按下表步驟加樣：
試劑名稱(μL) | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 40 | - | - |
標準品 | - | 40 | - |
蒸餾水 | - | - | 40 |
顯色液 | 1200 | 1200 | 1200 |
100℃沸水浴15min，冷卻至常溫，8000rpm，常溫離心10min（如果待測液依舊渾濁，可以加大離心轉速）吸取1mL上清，于560nm處測定吸光值，分別記為A測定、A標準、A空白。分別計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白（標準管和空白管只需做1-2次）。
二、唾液酸含量的計算
（1）按樣本蛋白質濃度計算（蛋白濃度需自行測定）：
唾液酸含量（mmol/g prot）= ΔA測定×C標÷ΔA標準×V樣總÷（Cpr×V樣總×1000）
= 0.004×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
（2）按樣本質量計算：
唾液酸含量（mmol/g 質量）= ΔA測定×C標÷ΔA標準×V樣總÷W=0.004×ΔA測定÷ΔA標準÷W
（3）按細菌/細胞數量計算：
唾液酸含量（mmol/104 cell）= ΔA測定×C標÷ΔA標準×V樣總÷N= 0.004×ΔA測定÷ΔA標準÷N
（4）按照液體樣本體積計算：
唾液酸含量（mmol/L）= ΔA測定×C標÷ΔA標準=4×ΔA測定÷ΔA標準
V樣總：加入提取液之后的樣本體積，0.001L；C標：標準品的濃度，4mmol/L；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細胞數量，萬個；1000：換算系數，1L=1000mL。
注意事項：
1、 100℃沸水浴溫度比較高，建議使用封口膜為離心管纏口，或使用螺旋蓋的離心管。
2、 ΔA測定的數值范圍在0.005-0.6之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定，如果測定吸光值小于線性范圍吸光值，需要增加樣本量后再次測定，注意同步計算公式。
實驗實例：
1. 吸取40μL牛血清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得A測定 = 0.291，A空白 = 0.002，?A測定= 0.289，A標準 = 0.415，?A標準 = 0.413。按液體樣本體積計算唾液酸含量得：
唾液酸含量（mmol/L）= 4×ΔA測定÷ΔA標準=2.799 mmol/L。
2. 吸取40μL血漿，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得A測定 = 0.227，A空白 = 0.002，?A測定= 0.225，A標準 = 0.415，?A標準 = 0.413。按液體樣本體積計算唾液酸含量得：
唾液酸含量（mmol/L）= 4×ΔA測定÷ΔA標準=2.179 mmol/L。
3. 稱取0.123g小鼠肝臟，加入1mL提取液，冰浴勻漿，離心后取上清，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得A測定 = 0.07，A空白 = 0.002，?A測定 = 0.068，A標準 = 0.415，?A標準 = 0.413。按樣本質量計算唾液酸含量得：
唾液酸含量（mmol/g 質量）= 0.004×ΔA測定÷ΔA標準÷W = 0.0054 mmol /g 質量。
參考文獻：
[1] Yongpoovorawan, S. O. C. , Role of serum total sialic acid in differentiating cholangiocarcinoma from hepatocellular carcinoma[J]. World Journal of Gastroenterology,2003,9(10):2178-2181.
[2] Lu yiqin , Glycophorin variants and contents of sialic acid and total sulfhydryl groups on erythrocyte membranes of residents in a malaria hyperendemic area[J]. Chinese Medical Journal,1998,111(7):606-609.
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