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專注于生物學試劑及試劑盒領域
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產品型號：BC4750-50T/24S
更新時間：2024-03-23
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：3696
010-50973130
產品分類
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DPPH自由基清除能力檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC4750
規格：50T/24S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體60 mL×1瓶（自備） | 常溫保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：無水乙醇自備；
2、 試劑二：粉劑置于瓶內EP管中。臨用前加入6.08 mL試劑一振蕩溶解，用不完的試劑可于-20℃保存1個月，建議分裝保存，避免反復凍融；臨用前根據試驗所需量按照試劑二：試劑一（V:V）= 4：21的比例配制成工作液，現配現用，用不完的工作液可于2-8℃保存一周；
3、 試劑三：10 mg維生素C。臨用前加入1 mL提取液，充分振蕩溶解，配成10 mg/mL維生素C溶液，2-8℃保存兩周；用于陽性對照。
產品說明：
DPPH自由基一種很穩定的氮中心的自由基，是樣本抗氧化能力的重要指標之一，廣泛應用于抗氧化類食品、保健品及藥品的研究中。
DPPH自由基有單電子，其醇溶液呈紫色，在515 nm處有強吸收。當有抗氧化劑存在時，DPPH自由基被清除，其溶液顏色變淺，515 nm的吸光度下降，在一定范圍內其吸光度的變化與自由基被清除的程度成正比。本試劑盒中，通過吸光度下降的程度來反映樣本清除DPPH自由基的能力。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、臺式離心機、無水乙醇、研缽/粉碎機、烘干箱、30~50目篩和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本的制備（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
（1）植物樣本的制備：將新鮮樣本置于60℃烘箱烘干至恒重，研缽研碎（或粉碎機粉碎），過30~50目篩。稱取約0.05 g樣本，加入1 mL提取液，40℃水浴浸提30 min。室溫10000 rpm 離心10 min，取上清，置冰上待測。
（2）紅酒、果汁等液體樣本：吸取100 μL樣本溶液加入900 μL提取液，旋渦振蕩混勻，室溫10000 rpm 離心10 min，取上清，置冰上待測。
（3）提取物或者藥物：可用提取液配制成一定濃度，如5 mg/mL。
注意：不同樣本清除DPPH自由基的能力可能相差很大，為保證實驗結果的準確性，樣本要根據預實驗結果進行適當調整（如清除率大于90%，建議將提取的樣本用提取液進行稀釋；清除率小于5%，建議加大烘干樣本
質量或液體樣本體積進行提取）。
二、測定步驟
1、分光光度計預熱30 min以上，調節波長至515 nm，無水乙醇調零。
2、陽性對照的準備：若需要線性關系，建議將10 mg/mL的維生素C溶液用提取液配制成0.3、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 mg/mL的維生素C溶液待用，稀釋可參考下表；若需要清除率約為100%的陽性對照，則建議將10 mg/mL維生素C溶液用提取液配制成大于0.3 mg/mL的維生素C溶液待用。
序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 試劑三體積（µL） | 提取液體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
2 | 1 | 300 | 700 | 0.3 |
3 | 0.3 | 500 | 100 | 0.25 |
4 | 0.25 | 300 | 300 | 0.125 |
5 | 0.125 | 300 | 300 | 0.0625 |
6 | 0.0625 | 300 | 300 | 0.03125 |
7 | 0.03125 | 300 | 300 | 0.015625 |
備注：實驗中每個陽性對照管需25µL試劑三。
3、操作表：在1.5 mL EP管中分別加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測定管 | 對照管 | 陽性對照管 |
上清液 | - | 25 | 25 | - |
試劑三 | - | - | - | 25 |
提取液 | 25 | - | - | - |
試劑一 | - | - | 975 | - |
工作液 | 975 | 975 | - | 975 |
渦旋混勻，室溫避光靜置30 min，于515 nm處的吸光度。分別記為A空白、A測定、A對照、A陽性對照。每個測定管需設一個對照管。陽性對照管和空白管只需測1-2次。 | ||||
三、計算公式
1、陽性對照的自由基清除率計算公式：
DPPH自由基清除率DVC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100%
2、樣本的自由基清除率計算公式：
DPPH自由基清除率D% =[[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白]×100%
注意事項：
1、不同樣本清除DPPH自由基的能力可能相差很大，如果要比較不同樣本的DPPH自由基清除能力，建議對于同一批樣本加入等量的樣本，紅酒、組織勻漿、果汁等液體樣本加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度。在比較時，將樣本根據預實驗結果進行適當調整，比較同樣濃度（相同稀釋倍數）的清除率大小。
2、樣本建議當天提取當天檢測。
實驗實例：
1、 稱取0.05g益母草葉片加入1mL提取液進行樣本處理，離心取上清后按測定步驟操作，測得A空白=1.037、A對照=0.088、A測定=0.228，根據計算公式得：
DPPH自由基清除率D% =[[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白]×100%=86.5%。
2、 取100μL紅酒加入900μL提取液進行樣本處理，離心取上清后按測定步驟操作，測得A空白=1.037、A對照=0.012、A測定=0.760，根據計算公式得：
DPPH自由基清除率D% =[[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白]×100%=27.9%。
3、 稱取0.05g枸杞加入1mL提取液進行樣本處理，離心取上清稀釋20倍后按測定步驟操作，測得A空白=1.037、A對照=0.005、A測定=0.829，根據計算公式得：
DPPH自由基清除率D% =[[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白]×100%=20.5%。
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