北京索萊寶科技有限公司
專注于生物學試劑及試劑盒領域
服務熱線：18101056239
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產品型號：BC4910-50T/48S
更新時間：2024-03-23
廠商性質：生產廠家
訪 問 量 ：1215
010-50973130
產品分類
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肌酐（Cr）含量檢測試劑盒說明書（肌氨酸氧化酶法）
可見分光光度法
貨號：BC4910
規格：50T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
試劑六A液 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑六B液 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
1. 試劑一：臨用前每支加入1.7 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。
2. 試劑二：臨用前每支加入1.65 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。
3. 試劑三：臨用前每支加入1 mL蒸餾水（50T/48S），充分溶解。為方便儲存故多給一支。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。
4. 試劑三工作液：根據試驗所需用量，按照試劑三：蒸餾水=1:9的比例，充分混勻，現配現用。
5. 試劑四：臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩個月。
6. 試劑五：臨用前每瓶加入3.4 mL蒸餾水，充分溶解。用不完的試劑-20℃分裝保存兩周。
7. 試劑六：臨用前根據實驗所需用量，按照試劑六A液：試劑六B液=1:1的比例，充分混勻，現用現配。
8. 標準品：1 mg肌酐。臨用前加入1 mL蒸餾水，充分溶解，即1 mg/mL標準儲備液，2-8℃保存1個月。臨用前取50μL和200μL蒸餾水混合配制成200μg/mL的標準溶液備用，現用現配。
產品說明：
肌酐（creatinine，Cr），化學式是C4H7N3O，是肌肉在人體內代謝的產物，主要由腎小球濾過排出體外。血中肌酐來自外源性和內源性兩種，外源性肌酐是肉類食物在體內代謝后的產物；內源性肌酐是體內肌肉組織代謝的產物。
肌酐在肌酸酶的催化下肌酸水解生成肌氨酸和尿素，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化產生過氧化氫。過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林偶聯酚，生成有色化合物，在505nm 有特征吸收峰。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、超聲破碎儀。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌、細胞樣本的制備：按照細胞數量（104個）：提取液一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300W，超聲3秒，間隔9秒，總時間5 min）；于4℃，12000g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，混勻，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
2、組織樣本的制備：按照質量（g）：提取液一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿后于4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，混勻，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
3、血清（漿）：取100 μL血清（漿）加入1 mL提取液一，4℃，12000 g離心10 min，取0.8 mL上清液，再加入0.15 mL提取液二，混勻，4℃，12000 g離心10 min后取上清待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計預熱30 min以上，調節波長至505 nm，蒸餾水調零。
2、 按下表步驟加樣：
測定管 | 空白管 | 標準管 | |
樣本 | 60 | - | - |
蒸餾水 | - | 60 | - |
標準液 | - | - | 60 |
試劑一 | 60 | 60 | 60 |
試劑二 | 60 | 60 | 60 |
試劑三工作液 | 15 | 15 | 15 |
試劑四 | 15 | 15 | 15 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，反應10 min。 | |||
試劑五 | 120 | 120 | 120 |
試劑六 | 270 | 270 | 270 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）條件下，顯色30 min。 | |||
蒸餾水 | 400 | 400 | 400 |
充分混勻。測定505 nm處的吸光度。分別記為A測定、A空白、A標準。ΔA測=A測定-A空白，ΔA標=A標準-A空白。 | |||
注：空白管只需做1-2次。
三、肌酐含量計算
1、 計算公式
（1）按照蛋白濃度計算
肌酐含量（μg/mg prot）= C標×ΔA測÷ΔA標×V樣÷（V樣×Cpr）=200×ΔA測÷ΔA標÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
肌酐含量（μg/g 質量）= C標×ΔA測÷ΔA標×（V上清+V提取液二）÷（W×V上清÷V提取液一）
= 237.5×ΔA測÷ΔA標÷W
（3）按照細菌或細胞數量計算
肌酐含量（μg/104 cell）= C標×ΔA測÷ΔA標×（V上清+V提取液二）÷（細胞數量×V上清÷V提取液一）
= 237.5×ΔA測÷ΔA標÷細胞數量
（4）按照血清（漿）體積計算
肌酐含量（μg/mL）= C標×ΔA測÷ΔA標×(V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)]
= 2612.5×ΔA測÷ΔA標
C標：標準管濃度，200 μg/mL；V樣：加入樣本體積，60 μL=0.06 mL；V上清：提取時上清液體積，0.8 mL；V提取液一：加入提取液一體積，1 mL；V提取液二：加入提取液二體積，0.15 mL；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；細胞數量：以104計；V液體：液體樣本體積，0.1 mL。
注意事項：
1、提取液中含有蛋白沉淀劑，提取的上清液不能用于蛋白濃度的測定。若想要用蛋白濃度計算肌酐含量需要另取樣本，即取相同質量的組織、同等數目的細菌或細胞，用1.1875mLPBS（生理鹽水）勻漿；取相同體積的血清（漿），用1.206mLPBS（生理鹽水）勻漿（相當于提取步驟最終樣本上清液），用BCA法進行蛋白濃度測定。
2、如果測定吸光值超過標準管吸光值，建議用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定。如果ΔA測定小于0.01，建議增大樣本量后再進行測定。
1、 取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液一進行勻漿研磨離心，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定-A空白=0.159-0.016=0.143，ΔA標=A標準-A空白=0.373-0.016=0.357。按樣本質量計算含量得：肌酐含量（μg/g 質量）=237.5×ΔA測÷ΔA標÷W=951.3 μg/g 質量。
2、 取100μL牛血清加入1mL提取液一，取0.8mL上清后加0.15mL提取液二，離心取上清，之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測=A測定-A空白=0.095-0.079=0.079，ΔA標= A標準-A空白=0.373-0.016=0.357。按照液體體積計算含量得：肌酐含量（μg/mL）= 2612.5×ΔA測÷ΔA標=578 μg/mL血清。
肌酐含量檢測試劑盒 氮代謝 肌酐含量檢測試劑盒 氮代謝
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