海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒糖代謝

產品簡介：

海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒糖代謝
有效期
6個月
儲存條件
2-8℃
單位
盒
英文名稱
Trehalose synthase (TS) Activity Assay Kit
檢測方法
可見分光光度法 Spectrophotometer
規(guī)格
50T/24S

產品型號：BC4950-50T/24S

更新時間：2024-04-17

廠商性質：生產廠家

訪問量：837

服務熱線

010-50973130

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產品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細胞酸性磷酸酶細胞堿性磷酸酶果膠系列轉氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產品介紹

海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC4950

規(guī)格：50T/24S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體7mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×2瓶	2-8℃保存
試劑三	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑四	液體30 mL×1瓶	2-8℃保存
標準品	粉劑×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1、試劑二：臨用取一瓶前先加入7 mL蒸餾水，震蕩使其充分溶解（若溶解后的試劑中有黑色顆粒物，可離心后取上清使用），用不完的試劑2-8℃保存2周。

2、工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四1:1等體積混合，根據(jù)樣本實際所需用量現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、標準品：臨用前加入1 mL蒸餾水配制成50 μmol/mL的麥芽糖標準溶液，用不完的試劑2-8℃保存2周。然后用蒸餾水16倍稀釋成3.125 μmol/mL的麥芽糖標準溶液（建議吸取25μL 50μmol/mL麥芽糖標準溶液，加入375μL蒸餾水中，充分混勻）待測，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產品說明：

海藻糖是功能性低聚糖，具有非還原性、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結性等特性，是細胞在不良環(huán)境條件下產生的一種重要的抗逆應激物之一，它對生物大分子和生物組織有著非特異性的保護作用。

海藻糖合成酶（Trehalose Synthase，TS）能催化麥芽糖生成海藻糖，是海藻糖生物合成的關鍵途徑之一。本試劑盒使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖，通過葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖含量，按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合成酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、低溫離心機、恒溫水浴鍋、可調式移液槍、研缽/勻漿器、蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1 mL提取液，超聲波破碎細胞（功率200W，超聲3s，間隔9s，重復30次）；然后8000 g，4℃，離心10 min，取上清（若上清不夠澄清，建議重復上述離心步驟），置于冰上待檢。

組織：按照組織質量（g）: 提取液體積（mL）為1 : 5~10 的比例（建議稱取約0.1 g組織，加入1 mL提取液），進行冰浴勻漿。8000 g，4℃，離心10 min，取上清（若上清不夠澄清，建議重復上述離心步驟，置于冰上待檢。

二、測定步驟

1、分光光度計預熱30 min以上，調節(jié)波長至505 nm，蒸餾水調零。

2、在EP管中進行如下操作：

（1）酶促反應

加入試劑（μL）	對照管	測定管	標準管	空白管
樣本	100	100	-	-
試劑一	-	100	-	-
標準溶液	-	-	100	-
蒸餾水	-	-	100	200
充分混勻，35℃水浴反應2 h，沸水浴5 min終止反應，冷卻至室溫。			-	-
試劑一	100	-	-	-
試劑二	200	200	200	200
混勻，40℃過夜反應（12 h以上），沸水浴5 min終止反應，冷卻至室溫。10000 g ，25℃離心10 min，取上清待測。

（2）顯色反應（在EP管中進行以下操作）

加入試劑（μL）	對照管	測定管	標準管	空白管
上清液	100	100	100	100
工作液	900	900	900	900
充分混勻，37℃反應30 min，于1 mL玻璃比色皿中測定505 nm處的吸光值，分別記為A對照、A測定、A標準與A空白，ΔA測定=A對照-A測定、ΔA標準=A標準-A空白。

注：空白管和標準管只需測1~2次。

三、酶活性計算

1、按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

TS酶活（U/mg prot）= C標×ΔA測定÷ΔA標準×V樣÷（V樣×Cpr）÷T×F÷2

=13.02×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F

2、按樣本質量計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

TS酶活（U/g 質量）= C標×ΔA測定÷ΔA標準×V樣÷（V樣÷V樣總×W）÷T×F÷2

=13.02×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F

3、按細菌或細胞數(shù)量計算：

單位的定義：每10⁴個細菌或細胞每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

TS酶活（U/10⁴ cell）= C標×ΔA測定÷ΔA標準×V樣÷（V樣÷V樣總×cell）÷T×F÷2

=13.02×ΔA測定÷ΔA標準÷cell×F

C標：標準管濃度，3.125 μmol/mL=3.125×10³ nmol/mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：加入樣本體積，0.1 mL；T：反應時間，120 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；cell：細胞或細菌總數(shù)，以萬計；F：稀釋倍數(shù)； 2：1分子麥芽糖可轉化為2分子葡萄糖。